人肝细胞再生因子表达载体构建及抗肝纤维化的研究b |
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人肝细胞再生因子表达载体构建及抗肝纤维化的研究b 收藏此文
全部作者 ： 李玉香 王峰 牛俊奇 姜艳芳
第一作者单位 ： 吉林大学第一医院感染症科
论文摘要 ： 目的 探讨肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor (hgf)基因对肝纤维化的作用。方法 首先构建了hgf真核表达载体pci-neo-hgf，通过脂质体介导法，将hgf基因导入肝细胞中，western blo及免疫组化法观察到hgf基因表达，采用mtt法、检测细胞生长曲线观察肝细胞生长增殖情况，并建立大鼠肝纤维化模型，将pci-neo-hgf分别于成模同时、成模第六周、成模结束后对实验鼠进行右后肢内侧肌肉注射，观察pci-neo-hgf质粒对肝纤维化的作用。结果: pci-neo-hgf经限制性内切酶分析，片段与理论值相符，测序结果与gene bank 对比, hgfcdna序列同源性99%, 插入正确，将pci-neo-hgf转染cos7细胞，于转染12h就有表达，36-72h表达量较高，即2000pg．l-1左右，以后逐渐下降。通过阳离子脂质体介导，将hgf基因转染至人肝细胞中，观察到转染hgf基因的肝细胞增殖能力有所增强，抑制四氯化碳诱导的肝细胞凋亡；用裸质粒直接转染的方法，将pci-neo-hgf导入肝纤维化大鼠肝组织，肝功能、肝纤维化指标有所好转，部分大鼠肝纤维化减轻。结论: 1、成功地构建了pci-neo-hgf的真核表达载体，其携带的hgf基因可被转染至cos7细胞并分泌表达hgf蛋白。2、pci-new-hgf对体外培养的正常人肝细胞（hl-7702）的生长增殖有明显促进作用。3、给肝纤维化大鼠肌肉注射pci-neo-hgf，对ccl4诱导的肝纤维化有一定保护肝肝细胞、抗肝纤维化的作用。hgf基因治疗有望成为抗肝纤维化一种手段。
关键词 ： 肝细胞生长因子；表达载体/构建；细胞保护；肝纤维化；基因治疗
发表日期 ： 2008年01月14日
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