司帕沙星治疗耐多药肺结核病人的药效学研究

                    作者：刘兴峰，谭小芸，宁小艳，陈星浩

【摘要】  目的：研究司帕沙星分散片口服给药和局部介入治疗用药量的依据。方法:采用高效液相色谱法测定血清中司帕沙星浓度,在体外检测MIC、MBC、时间—杀菌及耐药梯度等试验。结果：8例肺结核患者血峰浓度于1.22小时到达(4.52±0.72)mg/L，1次给药24h后最低血药浓度为(0.52±0.26) mg/L,表观分布容积V/FC为 (77.48±8.33)L，该药MIC、MBC值为0.5/mg/L、1mg /L,耐药梯度范围在0.5~48/ mg/L。结论：耐药肺结核病人服用司帕沙星,应注意24h体内血药浓度维持在最低杀菌浓度之上,介入治疗用药浓度应在48mg/L以上。

【关键词】  司帕沙星分散片; 耐药肺结核; 药效学

　　Pharmacodynamics of Sparfloxacin Dispersible Tablet in Patients with MDR-TB

　　Abstract:Objective： To study the appropriate dose of sparfloxacin dispersible tablet (SPLX) given orally and through interven tional approach. Method： The concentration of sparfloxacin in serum were measured by HPLC MIC MBC time-bactei degradient and time-drug resistance gradient were detecd in vitro. Result： The peak concentration of sparfloxacin in serum of 8 patients are 4.52±0.72 mg/L in 1.22 hours and the mininal concentration of sparfloxacin in serum was 0.52±0.26 mg/L after patients were given a single dose with in 24 hours. The apparent volume of distribution was 77.48±8.33 L. The value of MIC and MBC were 0.5/mg.L and 1mg /L. The range of drug resistance gradient was 0.5 mg/L to 48/ mg/L. Conclusion： The dosage and internal time of sparfloxacin in patients with pulmonary tuberculosis would be controlled the concentration of sparfloxacin in interventional therapy should be above 48mg/L.

　　Key words：  Sparfloxacin dispersible tablet (SPLX)；  MDR-TB；  Pharmacodynamics       

　　耐多药结核病(MDR-TB)是指由至少对异烟肼和利福平同时耐药的结核分枝杆菌所引起的结核病。近年来,由于结核病疫情明显回升,耐药结核患者亦明显增加,给结核病的治疗和控制带来极大困难。为了提高结核病的治疗,科学合理用药。我们对司帕沙星分散片,进行了体内药代动力学，体外药效学和局部介入治疗研究,借以指导临床合理用药。

　　1  材料和方法

　　1.1  对象选择标准：①经抗结核药物正规治疗1年以上,痰结核菌持续阳性;②痰经罗氏法和Bact-TB培养均有结核分枝杆菌生长,显示对HR等多种抗结核药物耐药; ③均未使用过喹诺酮类药物;无心肝肾功能不全，严重糖尿病,排除孕妇、有精神病史及喹诺酮类药物过敏者。入选的8名受试者均为男性,年龄(26.1±8.1)岁,抗结核治疗方案为化疗HRZS 30名梯度试验受试者为已确诊的肺结核患者,均有不同程度耐喹诺酮类药物史。

　　1.2  仪器及试剂：高效液相色谱仪,600型泵,486型紫外检测器, NOVA-PAK C18分析柱(WATERS，美国),BECTEC-960培养仪,试剂为改良7 H 9培养基。

　　1.3  给药及取血方法：受试者清晨空腹抽静脉血一次,立即口服司帕沙星片400mg (郑州永和药业股份有限公司生产),以200水送下,其后于0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0h各抽取静脉血3ml,室温放置后离心(3000ipm/10min),分离血清,置于－70℃保存,1周内完成测定。

　　1.4  药物浓度测定：采用HCPL法测定血清中的药物浓度。流动相为甲醇:0.01mol/L,磷酸盐缓冲液:0.5 mol/L,四丁基溴化铵(24︰72︰4),PH=3.35,流速1.0ml/min,检测波长294nm, 取受试者血清200μl,加6%高氯酸100μl,振荡混匀,以15000ipm离心5min,取上清液20μl进行分析, 司帕沙星的保留时间为6.61min。血清标准曲线制备:取司帕沙星储备液以正常人血清稀释成0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/L共6种浓度,并按前述方法处理后,分别取上清液20μl进行分析,以此标准曲线外标法对血中司帕沙星作定量测定。本法线性范围为0.5~8.0mg/L,以浓度对峰面积进行线性回归,直线回归方程为:A=7376+63211, r=0.9991。方法平均回收96.1%, RSD=2.0%,最低检测浓度为0.01mg/L。

　　1.5  体外药效学实验

　　1.5.1  实验准备：在改良7H9培养基中加司帕沙星药物100 mg/L,按二倍梯度稀释法稀释,然后在培养基内加入H37 RV标准株 (10-2CFV/ml) 0.1ml, 放37℃培养箱内培养,20d时观察最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)结果。

　　1.5.2  时间－杀菌试验：先将37℃标准株(10-2CFV/ml) 0.2ml,浸泡在10 mg/L司帕沙星药液2 ml中,每2h取0.1 ml接种于培养基内,共12管放37℃培养箱内培养,20d时观察结果。

　　1.5.3  耐药梯度试验：在改良7H9培养基中加司帕沙星药物100mg/L,按二倍梯度稀释法稀释,然后在培养基内加入耐药病人临床分离株(10-2CFV/ml) 0.1ml,放37℃培养箱内培养,20d时观察结果,共做30例,统计耐药范围。

　　1.6  数据处理：采用3P 97程序处理药时数据,确定房室模型,计算出药代动力学等参数。

　　2  结  果

　　2.1  8例肺结核病人空腹口服400mg 司帕沙星后结果见药-时曲线图 (图1), 患者的药-时曲线经模型拟合为一房室模型,其药物动力学参数见表1。

　　图1  司帕沙星在肺结核病人中的药-时曲线　略

　　表1  司帕沙星在肺结核病人体内药物动力学参数　略

　　2.2  20d时观察最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)结果分别为0.5、1 mg/L。30例耐药结核病人的平均耐药梯度范围在0.5~48 mg/L 。时间-杀菌试验结果证明8~10h/培养20d,无TB菌生长。

　　3  讨  论     

　　司帕沙星 (SPLX)是喹诺酮类广谱抗菌药,具有口服吸收良好，组织分布广泛，血浆蛋白结合力低，细胞内渗透性强，消除半衰期长等药动学特点。主要作用于结核分枝杆菌脱氧核糖核酸 (DNA) 旋转酶(拓扑异构酶Ⅱ),抑制旋转酶亚单位,从而抑制细菌复制和合成,达到抗菌的作用。无论对细胞内还是细胞外的结核菌抑菌活性均比同类药物强。 司帕沙星使用安全,毒副作用小,尤其重要的是与抗结核药物之间无交叉耐药,是目前治疗耐多药肺结核病的重要药物之一。与一线或二线抗结核药二药或三药组合应用时,可提高药物的活性,呈协同作用。     

　　本试验报道了8例肺结核患者口服司帕沙星400mg后的药代动力学特性,在8例肺结核病人口服400mg司帕沙星后,吸收速度常数为 (2.76±1.34) h,吸收半衰期T1/2(ka)为 (6.49±1.70) h,说明肺结核病人口服司帕沙星后吸收快,而消除较慢。达峰时间Tp为(1.22±0.66)h,药-时曲线下面积为(48.35±5.38)h mg/L,以上参数与国内在健康人中的研究结果基本一致。表观分布容积V/FC为(77.48±8.33),高于国内在健康人中的研究结果(49.95±8.81),P<0.05, 说明司帕沙星在肺结核患者体内具有良好的体液!组织分布性。     

　　药敏实验结果表明: 司帕沙星对人型结核分枝杆菌 (H37RV) 的最低抑菌浓度为MIC 0.5/mg/L,,最低杀菌浓度MBC为1 mg/L。本文测得平均高峰血药浓度Cmax 为 (4.51±0.95) mg/L,为最低杀菌浓度的4.51倍。一次给药后8~12h可测得体内血药浓度为2.28~1.33 mg/L，高于最低抑菌浓度。一次给药后24小时测得体内血药浓度为 (0.52±0.26) mg/L, 低于最低抑菌浓度,同时“司帕沙星对结核杆菌的时间-杀菌曲线”表明司帕沙星体外杀菌时间一般不得低于8h。因此,为了更好地发挥司帕沙星对结核杆菌的杀菌作用,应使司帕沙星的体内血药浓度24h维持在最低杀菌浓度之上,推荐肺结核患者服用司帕沙星采取每次300mg,每日两次的服药方法。  

　　耐药结核病多数病程较长,久治不愈、间断咯血、反复感染。纤维增殖、血管稀少、局部血运不良,影响药物对病变的渗透。即使是靠消耗能量主动转运而通过支气管肺屏障能力较好的药物(如氟喹诺酮类),当支气管肺屏障由于炎性渗出、干酪样坏死、纤维性增生、血管扭曲变细而处于异常状态时,其向肺组织的渗透也必然减少。病变组织缺氧,局部酸性环境,能量产生减少,也使药物通过支气管肺屏障的能力降低,致使病变组织难以达到有效的药物浓度。空洞病灶内的结核分枝杆菌数量最多,洞壁上液化干酪坏死覆盖物中的结核分枝杆菌可达107~109,结核空洞内的药物浓度很难达到最低抑菌浓度。所以,口服或静脉化疗药效常不理想。介入治疗能使病变组织的药物浓度明显提高。上述试验证明,30例耐药结核病人的平均耐药梯度范围在0.5~48mg/L,时间-杀菌试验结果证明8~10h/培养20d,无TB菌生长。介入治疗药物浓度应在48mg/L以上,药物在结核空洞内保存8~10h,即可杀灭全部的结核菌,使病人早日得到康复。

【参考文献】
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