作者：徐明清 黄燕虹 张志 张伟平 刘文粤 【关键词】 罗哌卡因
摘要：目的：观察硬膜外麻醉下行腰间盘突出髓核摘除术病人外周血免疫相关因子CD3、CD4、CD8、CD20、IL-2、INF-γ的含量变化，探讨罗哌卡因对淋巴免疫的影响，从而指导围术期麻醉用药及管理。方法：收集30例运用罗哌卡因进行硬膜外麻醉实施腰间盘突出髓核摘除术患者麻醉用药前1h、术后24h及术后48h外周血，利用流式细胞仪测不同时相CD3、CD4、CD8、CD20、IL-2、INF-γ的含量。结果：术后患者CD3无明显变化，CD4、CD20、IL-2、INF-γ含量升高，CD8含量降低。结论：运用罗哌卡因麻醉的术后患者T淋巴细胞及B淋巴细胞增多，细胞因子分泌增加，无明显免疫抑制。
关键词：罗哌卡因；免疫；麻醉
The Effects of Ropivacaine on the Content of CD3 CD4 CD8 CD20 IL-2 INF-γ
Abstract： Objective: To study the effect of ropivacaine on lymphocyte immunity. Method: 30 patients undergoing lumbar diskectomy suffer epidural anesthesia with ropivacaine. Venous blood samples were collected to measure the contents of CD3, CD4, CD8, CD20, IL-2, and INF-γ. Result： After operation, the contents of CD4, CD20, IL-2 and INF-γ were increased, that of CD3 was constant and that of CD8 was decreased. Conclusion： Ropivacatine has not marked influence on lymphocyte immunity.
Key words：Ropivacaine; Immunity; Anesthesia
罗哌卡因是一种较新的长效酰胺类局麻药［1］，目前主要用于硬膜外麻醉和手术镇痛，运用范围较广。目前的研究表明麻醉药物及疼痛应激反应对手术病人细胞免疫、体液免疫及细胞因子存在一定的影响［2］,而围手术期患者免疫功能的状态对术后病人的感染、肿瘤扩散及预后具有重大意义。本研究分析了运用罗哌卡因进行硬膜外麻醉实施腰间盘突出髓核摘除术前、术后病人外周血免疫相关因子CD3、CD4、CD8、CD20、IL-2、INF-γ的含量变化，为罗哌卡因更好的运用提供参考。
1 材料与方法
1.1 一般资料：择期行实施腰间盘突出髓核摘除术病人30例,ASA I～II级，男22例，女8例，年龄18～48岁。
1.2 麻醉：病人于T12L1或L1～2硬膜外穿刺，成功后，向头侧置入导管3～4cm，注入0.75%罗哌卡因，麻醉平面控制在T10～5，术中监测ECG、SpO2和BP。病人术中输注林格液，未用止血药物、代血浆或输血，控制输液量及输液速度，维持血液动力学平稳。
1.3 流式测定：分别于麻醉用药前1h（T1）、术后24h（T2）和术后48h（T3）抽取静脉血2ml，加入EDTA-2Na抗凝管中，24h内进行流式细胞仪检测。采用美国BD公司FACScan型流式细胞仪检测，所用流式试剂为BD公司提供。CD3、CD4、CD8及CD20测定方法为：取200 μl 抗凝血，加相应荧光标记单抗20 μl，放置30 min，加红细胞溶解液1 ml，待其透明后3 min离心（2000 r/min，4 min），弃去上清，荧光洗液（PBS＋0.1％NaN3叠氮钠＋5％小牛血清）或Hanks液1ml洗2遍，0.5 ml洗液悬起，上机，测定。IL-2和INF-γ的测定方法为：淋巴细胞活化以后才分泌细胞因子且迅速分泌到细胞外。因此先利用刺激剂PMA体外激活淋巴细胞，然后用Monensin蛋白转运抑制剂阻止细胞因子分泌到细胞外，使细胞因子在细胞内滞留到一定的量，再采用流式细胞术细胞内抗原标记进行检测。
1.4 结果统计：计量资料以均数±标准差表示，计数资料应用X2 检验，P＜0.05为有显著性差异。
罗哌卡因对外周血cd3 来自: 免费论文网www.paper800.com 2 结果
术后患者CD3无明显变化，CD4、CD20、IL-2、INF-γ含量升高，CD8含量降低。具体统计结果见表1、2。
表1 CD3、CD4、CD8含量变化表 略
表2 CD20、IL-2、INF-γ含量变化表 略
3 讨论
手术期间，病人的免疫状况受诸多因素影响，情绪焦虑、疼痛、麻醉、手术应激和感染等因素都会影响病人的免疫状况，引发不同组分淋巴细胞在外周血循环中的分布，改变细胞内因子的分泌。目前有研究表明麻醉存在一定的免疫抑制作用，影响病人术后的恢复［3，4］。
T淋巴细胞是机体免疫的重要成分，T细胞与其他细胞及细胞因子间的相互作用共同完成免疫识别、活化及杀伤等功能，Th细胞可刺激B细胞产生抗体并辅助其它T细胞完成免疫反应。Ts细胞则具有免疫抑制的功能，Th与Ts细胞相互协调，保证体内免疫功能的正常。B细胞介导机体内体液免疫应答，B 淋巴细胞与T 淋巴细胞相互作用并在Th2细胞辅助下被激活，细胞增殖，成熟并产生抗体，参与体液免疫应答［5］。
白细胞介素2(IL-2)是机体内重要的T细胞生长因子，是保障机体正常免疫功能的关键，具有多种生物学功能。如：能够维持活性T细胞增生，诱生LAK细胞，促进B细胞分泌抗体，促进NK细胞产生干扰素，能提高TH细胞数与功能来增强机体的免疫功能等. 与其他的细胞因子，如：sIL2R，IL-6，IL-1，IL-4，TNF等形成动态免疫调节网络，维持机体正常的免疫调节功能。
INF-γ是重要的生长负调节因子，兼有抗病毒复制，抑制肿瘤细胞增殖，调节淋巴系统的功能，增强自身免疫力，INF-γ是主要的巨噬细胞活化因子（macrophage-activating factor，MAF），促进巨噬细胞吞噬能力和炎症反应，并可直接促进T、B细胞分化和CTL成熟，刺激B细胞分泌抗体，从而增强机体免疫机能。诱导巨噬细胞生成NO的功能。在TNF与脂多糖的适宜刺激下，INF-γ可作为NO生成的合适诱导剂，对抑制肿瘤组织增殖与心血管重塑具有重要意义。同时INF-γ对维持机体自身免疫的稳态具有作用。
在本研究中，术后病人CD4、CD20显著升高，而CD8呈下降趋势，具免疫抑制功能的Ts细胞浓度下降，Th细胞增多，B细胞增加，这表明患者的T细胞及B细胞反应明显增强， 同时还观察到细胞因子IL-2和INF-γ呈逐渐上升的趋势，这与CD4的变化是相符和的，表明病人体内出现较多的Th0细胞向Th1细胞分化，Th1细胞分泌大量的IL-2和INF-γ增强体内的细胞免疫。通过本研究表明罗哌卡因对病人的T淋巴细胞及B淋巴细胞无明显抑制作用。
参考文献：
［1］Concepeion M，Arthur GR，Steele SM，et al. A new local aneathetic, ropivacaine, its epidural effects in human［Ｊ］. Anesth Analg, 1990, 70: 80-85.
［2］焦志华，马君志. 麻醉、手术对肿瘤患者细胞免疫的影响［Ｊ］. 国外医学，麻醉学与复苏分册,2002,23：303-305.
［3］薛静波,吴虹,鲁迎年,等. 大肠癌患者手术前后外周血T 淋巴细胞亚群和血TNF 水平的检测及意义［J］.中国肛肠病杂志,1999,19(6): 12-13.
［4］侯建民,陈克能,王社军,等. 全麻下经胸食管癌切除前后病人外周血TNF、T 淋巴细胞及亚群的改变［J］.中华麻醉学杂志,1998,18(5): 283-285.
［5］Suni MA, Ghanekar SA, Houck DW, et al. CD4 + CD8 low T lymphocytes exhibit enhanced cytokine expression, proliferation and cytotoxic activity in response to HCMV and HIV-1 antigens ［J］. Eur Immunol, 2001, 31: 512-2520.
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