acra和acrb基因的原核表达、抗体制备及初步应用 |
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acra和acrb基因的原核表达、抗体制备及初步应用 收藏此文
全部作者 ： 吕殿红 蒋红霞 陈杖榴 曾振灵
第一作者单位 ： 华南农业大学兽医学院
论文摘要 ： 【目的】对大肠杆菌 acrab外排泵系统 acra、acrb基因进行原核表达，获得的表达产物acra、acrb蛋白分别免疫兔，制备相应的抗体，建立elisa检测方法检测兽医临床分离的大肠杆菌外排泵表达水平。【方法】扩增acrab外排泵系统acra、acrb基因片段，扩增片段分别与原核表达载体 pet-41a(+)连接构建重组质粒，于bl21（de3）中进行诱导表达。表达产物 acra、acrb纯化后分别免疫新西兰大白兔，获得抗 acra、acrb抗血清。表达产物经western blot 鉴定分析。acra、acrb蛋白分别按不同的浓度包被酶标板，与不同稀释倍数的抗血清反应，通过elisa检测确定最佳抗原包被浓度及抗体稀释度。用建立的elisa检测方法，检测10株多重耐药大肠杆菌外排泵表达水平。【结果】成功克隆和表达了 acra、acrb基因片段，经 sds-page检测表明两种表达产物 acra、acrb均以可溶性蛋白形式存在。acra、acrb抗原蛋白最佳包被浓度分别为 1.0 μg•ml-1和0.5 μg•ml-1，抗 acra、acrb血清的最佳稀释度分别为 1∶800和 1∶400。用初步建立的elisa方法检测10株大肠杆菌多重耐药菌株外排泵表达水平，结果表明分别用两种蛋白做包被抗原检测外排泵表达水平的结果一致，大部分菌株外排泵表达水平增高。【结论】本研究通过原核表达的方法获得可溶性蛋白acra、acrb并制备了相应的抗体，分别用两种蛋白做包被抗原建立的elisa检测方法检测外排泵表达水平，检测结果一致。
关键词 ： 大肠杆菌；外排泵；原核表达；抗体；elisa方法
发表日期 ： 2007年12月27日
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